細菌呼吸鏈復合物II活性比色法定量檢測試劑盒產品說明書（中文版）

主要用途

  細菌呼吸鏈復合物II（琥珀酸－輔酶Q還原酶）活性比色法定量檢測試劑是一種旨在使用合成輔酶Q同功類似物二氯酚靛酚，通過反應系統測定樣品中二氯酚靛酚還原后吸光峰值的變化，即采用比色法測定樣品中酶活性的*而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。其適合于各種野生、培養或病原性細菌膜蛋白懸液樣品的琥珀酸－輔酶Q還原酶的特異性活性檢測。產品不含污染性蛋白酶，嚴格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩定，反應優化，檢測敏感。

技術背景

細菌呼吸鏈復合物II，通常稱為琥珀酸－輔酶Q還原酶或琥珀酸脫氫酶（Succinate-Coenzyme Q Oxidoreductase；Succinate Dehydrogenase；SQR），結構和功能上類同于線粒體復合物II，膜結合型，是細菌需氧呼吸鏈與三羧酸循環鏈接的主要元素：含有四個亞體，鐵硫中心（Fe-S clusters），輔因子為黃素（flavin）。其最特征性的酶活性是噻吩甲酰三氟丙酮（thenoyltrifluoroacetone；TTFA）敏感的琥珀酸－輔酶Q還原酶。復合物II催化琥珀酸（succinate）被氧化為富馬酸（fumarate），細菌內電子由供體黃素傳遞到內膜上輔酶Q受體（泛醌；ubiquinone）的能量轉移反應，進行呼吸鏈傳遞。基于琥珀酸底物，通過琥珀酸－輔酶Q還原酶的催化，氧化為富馬酸，同時氧化型二氯酚靛酚（dichlorophenal-indophenol；DCPIP）轉化為還原型二氯酚靛酚（dichlorophenal-indophenol；DCPIPH2），在分光光度儀下產生吸光峰值的變化（600nm 波長），由此定量測定琥珀酸－輔酶Q還原酶的特異活性。其反應系統是：

產品內容

  緩沖液（Reagent A）         毫升

  反應液（Reagent B）         毫升

  陰性液（Reagent C）           毫升

  底物液（Reagent D）          微升

產品說明書               1份

保存方式

保存在－20℃冰箱里，避免反復凍融；  反應液（Reagent B）和  底物液（Reagent D），避免光照，有效保證6月

用戶自備

比色皿：用于比色的容器

分光光度儀：用于比色分析

培養箱：用于孵育反應物

實驗步驟

實驗開始前，將－20℃冰箱里的試劑盒中的試劑溶液置入冰槽里融化；  緩沖液（Reagent A）室溫預熱；  反應液（Reagent B）和  底物液（Reagent D）注意避光。然后進行下列操作。

一、 測定準備

1． 準備好待測樣品（例如細菌膜蛋白樣品等），置于冰槽里 

2． 設定好分光光度儀（溫度為30℃）：波長為600nm，間隔60秒，讀數6次（共5分鐘），并置零